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疾病防治与技术服务
如何准确把控猪场的关键问题与ELISA在猪病防控的临床应用

一、血样检测的作用、意义

        A、采血检测的作用主要为评估疫苗水平、调整免疫程序、反映猪群健康度,最重要的能很好的指导生产,提供明确的方向。

         B、每次检测必须要有明确的检测目的,才便于采血方案的制定。

       C、每个场必须要建立自己检测结果的基准线,在没有自己的基准线时可以参考相似猪场的基准线。

        D、血样检测得到数值产生的结果最好要有比较的对象,并会辅助于对孤立的数值分析。

       E、血样检测→数值结果分析→制定策略→策略执行及落实→血样目的性复检,这是个良性的循环。比如做了疫苗,但是要知道效果如何,就要按照这个循环做下去。

       二、采血计划的制定

       1、检测的次数及时间。正常的检测,建议每年3次,分别为3月、7月、11月,每间隔4个月检测一次;多次的检测评估,结论才会更准确更接近事实。

       2、采样的数量。以500头母猪猪场为例:

      3、被采样猪只的选择。在目标猪群内随机采样,可采用的采样模式有等距采样和对角采样。

      4、病猪的采样不能与正常采样混合在一起,需要单独进行,单独分析,因为它不能代表整个群体。

      5、需注意:监测猪瘟、蓝耳时,采样时间为疫苗接种后3-4周;采样前建议使用抗应激药物(如强力拜固舒等);同时建议避开配种后2周和临产前2周这些敏感期种猪的采样。

      三、检测报告的分析、评估(如何看检测结果)

      报告真正的关键在于相互沟通(从管理层、实验室到生产一线),才能作出有价值、有核心的分析。

     (一)、伪狂犬gE野毒抗体及伪狂犬gB抗体

      S/N值小于0.6为阴性,大于0.7为阳性,在0.6-0.7之间为可疑。

     严重的溶血会对伪狂犬gE野毒抗体检测结果有影响,容易出现可疑的结果,造成检测结果的不准确。

    李老师以广东四会某猪场为例。伪狂犬gE野毒报告显示经产母猪阳性率100%,后备母猪阳性率0%,然后请大家猜测有什么问题?最终,通过与猪场的技术员沟通,其中主要因素是公猪伪狂犬gE野毒阳性率也是100%问题。如没有做到沟通,使得实验室很难作出准确的分析结果。所以实验室得出检测结果后,要结合猪场生产实际的情况,得到各方面的沟通,最终分析检测结果,制定好的策略。

      (二)、猪瘟

     Block值(阻断率)小于30是阴性;30至40是可疑;40以上是阳性,在阻断率>50有保护力(即抗体水平能中和相应的病毒)。

      目前国内生产的猪瘟疫苗,接种后阳性率80%以上,CV值20以下是理想的。接种高效猪瘟苗后,阻断率应该在55-95之间。

      (三)、蓝耳病

       蓝耳病检测结果可关注的4个S/P值,分别为:S/P值为0.4、0.8、1.6、2.5。

       1)检测结果0.4以下为阴性,0.4以上为阳性;

      感染蓝耳病的猪并不是终身带毒,它们是可以自我清除,最长时间是202天。但是在目前猪场养殖的复杂环境下,猪群容易受外界环境,及周围的排毒猪只重复感染;

       2)蓝耳病疫苗,有经典株(CH1R为代表)与变异株(JXA1为代表)之分,免疫经典株后,S/P值为0.8-1.2是免疫后的合理水平。免疫变异株后,从开始免疫之日起,14-21天检测的S/P值能达到2.5-3.0。但接种疫苗后的1个半月,逐步衰减,稳定在1.6左右,这是变异株疫苗的稳定水平。

       3)同时蓝耳的S/P值在2.5或者以上,不能说感染了野毒,只能说明猪群有感染的压力大。S/P>2.5,病毒血症;S/P在3.5~5.0,出现急性感染。只要哪个阶段的S/P 超过2.5样品数越多,那个阶段出现问题的可能性就会越大。

       Ex:若哺乳母猪监测的PRRS S/P 超过2.5的比例>10%,那么保育猪就会出现一系列问题(如继发副猪、链球、支原体、圆环等呼吸道疾病及表现皮炎肾病综合症的临床问题)。

       如果断奶母猪,怀孕阶段比例较高,则在配种时的空怀、返情的比例会出现一定程度的波动;

       公猪2.5比例特别高,配种、分娩都有不同程度的影响;影响程度就看母猪群对蓝耳易感猪的比例了

     猪群蓝耳病是否有问题,关键还是看分布图,如果出现高低不一(有0.4以下也有2.5以上),说明猪群不稳定。

       如果在疫苗接种2个月后再次检测,还出现高低不一,说明猪群里还存在源头,母猪群还没有净化好。因此看蓝耳病检测报告,主要是要看稳定的分布图。蓝耳病的风险往往就出现两极分化的猪群里。

     蓝耳病的病原监测(PCR)有2个关键点,一个是4周-5周龄,第二个9周-10周龄。免疫后的母猪检测出病原的几率较低;

      四、后备母猪的“驯化”

     基础种猪群蓝耳病要稳定,是蓝耳病抗体水平“大家”都高或者是“大家”都低,所以后备母猪需要“驯化”。母猪“驯化”目的是要后备母猪抗体水平与经产母猪抗体水平持平,母猪不稳定有时会呈现两个正态分布(两极分化),最危险的母猪还是阴性猪。比如后备猪是阴性,而经产母猪群是强阳性,最受伤害的是这些阴性的后备母猪。所以需要一个基准线(蓝耳抗体水平基本一致),比如经产母猪群基准线是S/P是0.8-1.6,那后备母猪经过“驯化“,到达了0.8-1.6之间,才能进群。

      对于蓝耳病检测中出现S/P值超过2.5的猪只,最好隔离在某个区域单独饲养,减少它们对其它猪只的感染。

      五、试验室的现场学习

    试验室检查方法:ELISA。每种检测方法都有它的优劣势,但是要选择适合自己场的方法。比如说检测所需的时间,检测结果的合理性等。

       1、酶标抗体和包被板是整个试验试剂中最重要的、价格最贵的;注意使用的用量,避免浪费和人为的污染,遵循“只出不进”原则;

       2、接收新到的试剂盒后,须在包装盒上注明接收的时间,使用原则是:先进先出;

      3、血液样品送到检测人员的手中,溶血是比较常见的,轻微的溶血对结果的影响较小,但严重溶血是不可以用的,最主要的是影响伪狂犬gE野毒的检测结果,容易出现可疑的情况,影响到伪狂犬结果的判断;

       4、血清在2-8℃冷藏可以保存7天,在-20℃冷冻可保存一个月;

      5、在操作过程中,必须有操作记录表,详细的记录操作程序、时间;操作过程中最担心的是样品间的交叉污染,所以在加试剂时注意操作动作;

       6、检测结束后,样品不能立即处理丢弃,需保存一个月,便于特殊情况下复查;

       7、反应板要在恒温箱中放置,可以更好的保证检测数据的准确性。然而纯粹靠空调来温控反应温度,数据会存在的一定的差异或误差。

       8、对伪狂犬gB抗体的检测最好采取1:40的稀释法进行,以便能更好地对结果进行分析。

                养猪事业部/金翊坤



 
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